Protéomique fonctionnelle à haut débit pour les protéines de surface sur les cellules souches embryonnaires de souris
La protéomique est une analyse à haut débit de la structure et de la fonction des protéines dans les systèmes biologiques. Notre analyse protéomique ciblée sur les glycoprotéines utilise la chromatographie liquide (LC) comme outil de séparation conformément à la spectrométrie de masse (MS) en tant qu’analyseur pour identifier et quantifier les glycoprotéines et leur site de glycosylation. Dans une analyse typique, les protéines seront extraites d’échantillons biologiques, digérées en peptides enzymatiquement, et les peptides glycosylés seront enrichis chimiquement. Les glycopeptides liés à l’N seront analysés sélectivement par LC-MS. Des milliers de spectres de SP peptidiques peuvent être acquis en peu de temps et traités par des outils bioinformatiques pour inférer la structure et la fonction des protéines.
Ce projet sera axé sur l’amélioration de la sensibilité de la méthode de glycoprotéomique que nous avons mise au point précédemment (Sun et coll., MCP, 2007). Des remèdes efficaces seront déployés pour étudier les protéines membranaires des cellules mES. Notre laboratoire a une vaste expérience avec ces cellules, et nous avons à la fois l’hôte et le gène knockout cellules mES en culture. Les nouvelles connaissances acquises à partir de ces analyses sensibles nouvellement développées seront facilement évaluées par comparaison avec nos bases de données organisées pour identifier les marqueurs protéiques spécifiques aux cellules souches. Les liens établis entre la topologie moléculaire de surface et les réseaux de protéines intracellulaires pourraient également nous fournir de nouvelles connaissances sur la biologie et la physiologie des cellules souches.
L’exicuting d’un tel projet fournira aux étudiants des expériences pratiques sur tous les aspects de la technologie protéomique, y compris la chimie des protéines, les techniques de séparation par chromatographie liquide, la spectrométrie de masse en tandem et les compétences en analyse de données. Notre laboratoire abrite également diverses techniques moléculaires et cellulaires, telles que la culture et les tests de cellules de mammifères, les immunoessai, l’imagerie par fluorescence et les tests unicellulaires, qui peuvent être acquis pendant l’entraînement. Les étudiants formés avec succès auront l’occasion de poursuivre le projet en tant qu’étudiants diplômés.
Voir la description complète du projetBingyun Soleil
Université Simon Fraser
Stage de recherche Globalink